С помощью серологического метода можно определить антитела к вирусу Эпштейна-Барр. Такой способ диагностики позволяет судить о стадии течения заболевания и реакции иммунной системы. Появление различных классов антител происходит в определенной последовательности, которая давно изучена.

Антигенная структура вируса

После попадания в организм вируса иммунные клетки начинают выделять антитела. Они являются специфическими белками, которые реагируют с определенным антигеном. Антиген - это белок, полисахарид или нуклеиновая кислота, которая принадлежит другому организму и воспринимается как чужеродное вещество . Антитела выделяются лимфоцитами. Они прикрепляются к антигену и блокируют его. Так развивается ответная иммунная реакция.

Каждый возбудитель имеет свою антигенную структуру. У вируса Эпштейна-Барр она представлена следующими веществами:

• S-антиген, является специфическим для данной группы микроорганизмов, это протеины нуклеокапсида - ядерной оболочки вируса.
• V - специфичен для определенного типа микроорганизмов, образован гликопротеинами внешней оболочки. Эти два антигена характерны для семейства герпесвирусов.
• Ранний антиген (ЕА).
• Мембранный (МА) - определяется на поверхности зараженной клетки.
• Комплемент, связывающий ядерный антиген (EBNA).
• Капсидный антиген (VCA) - поздний антиген.

К ядерному и капсидному антигену вируса определяются антитела, принадлежащие к иммуноглобулинам классов М и G.

Порядок образования антител

Иммуноглобулины - специфические белки лимфоцитов. После появления в крови вируса и его антигенов лимфоциты начинают вырабатывать Ig . Первыми регистрируют иммуноглобулины, принадлежащие к классу М, которые синтезируются к раннему и капсидному антигену. Анти-VCA IgM могут определяться еще до появления клинических симптомов и в начале болезни. Высокие концентрации регистрируются на 1-6 неделе после попадания в кровь возбудителя, но уже с 3 недели постепенно начинают снижаться. Полностью исчезают в крови не ранее, чем через 1-6 месяцев после выздоровления.

Иммуноглобулины к раннему антигену появляются в острый период и исчезают быстро после выздоровления. Высокие концентрации сохраняются при обострении, а также у больных онкологическими заболеваниями, при аутоиммунных процессах и иммунодефицитных состояниях.

IgG выделяются к капсидному антигену, появляются рано - на 1-4 неделе болезни. Максимальное значение достигается ко 2 неделе, сохраняются пожизненно в более низкой концентрации. У детей младше 7 лет могут не определяться после перенесенного заболевания. Постоянные высокие титры VCA IgG говорят о хронической инфекции. Если в анализах получился отрицательный результат, то это может говорить об отсутствии контакта с вирусом или о том, что кровь взяли в раннем периоде, когда антитела еще не выработались в нужном количестве.

Результат анализа не может быть единственным основанием для диагноза. Необходимо сопоставлять его с симптомами и другими исследованиями.

Определение антител к ядерному антигену вируса можно проводить в период выздоровления. В острую фазу болезни они еще не синтезируются. Только на 3-12 месяц может быть положительная реакция на EBNA IgG. Определяться они могут на протяжении многих лет. Если в анализах нет нуклеарного антитела класса G, но присутствуют положительные капсидные IgM, то можно судить о существовании инфекции в данный момент. Если происходит реактивация возбудителя, то нуклеарный IgG снова увеличивается.

Определение антител к капсидному антигену

Антитела к VCA Ig определяются методом хемолюминесцентного иммунного анализа. Для интерпретации анализа опираются на величину 20,0 Ед/мл. Если определяется количество антител меньше, чем это число, то результат отрицательный, равное или большее количество - положительный. Если количество антител не определяется или указывает на отрицательный результат, то это не всегда отсутствие контакта с вирусом, в некоторых случаях такой результат говорит об острой фазе болезни. Чтобы исключить подозрения, через 10-14 нужно повторить анализ и дополнительно сдать на IgM.

Анализ на антитела к ядерному антигену

Анализ выполняют в срок до 5 дней. Используется также хемолюминесцентный анализ. Результаты интерпретируют в зависимости от полученных чисел:

• менее 5 Ед/мл - отрицательный результат;
• от 5 до 20 Ед/мл - сомнительный результат;
• более 20 Ед/мл - положительный результат.

Большие концентрации IgG против вируса Эпштейна-Барр говорят о положительном результате и об острой инфекции . Отрицательный результат при аналогичных иммуноглобулинах M и G говорит об отсутствии болезни. Увеличение IgG к ядерным антителам в фазу острой инфекции - показатель выздоровления. Концентрация иммуноглобулинов 5-20 Ед/мл говорит о том, что, скорее всего, контакт с возбудителем был в прошлом. Повторное исследование проводят через 2 недели.

Показания для исследования и подготовка к анализам

Для проведения исследования врач определяет необходимость проведения диагностики. Показаниями служат:

• подтверждение диагноза мононуклеоза;
• оценка эффективности лечения;
• определение стадии развития болезни;
• у больных раком для выявления причины патологии, связанной с вирусом Эпштейна-Барр.

Для подготовки к анализу необходимо прийти натощак в лабораторию. Последний прием пищи должен был быть не позднее 20 часов вечером. За сутки до проведения анализа исключают алкоголь, жирную пищу, физические нагрузки и стресс.

Исказить результат анализа могут хилез (большое содержание жиров в крови), гемолиз пробы крови (распад клеток), получение лучевого лечения и химиотерапии. Правильно выполненный анализ после соответствующей подготовки помогает сопоставить клинические данные с его результатом и не ошибиться с диагнозом.

Вирус Эпштейна-Барр (капсидный антиген, VCA), антитела IgM

Вирус Эпштейна-Барр

Lymphocryptovirus подсемейства Gammaherpesvirinae семейства Herpesviridae , имеет 4 основных антигена: ранний антиген (early antigen - ЕА), капсидный антиген мембранный антиге н (membrane antigen - MA); ядерный антиген

Эпидемиология

Патогенез.

Клинические проявления. Инфекционный мононуклеоз

1. Выздоровление.

У иммунокомпетентных пациентов

Серологическая диагностика

Показатель	Характеристика
Материал	Венозная кровь
Правила подготовки пациента	Стандартные, см. раздел № 15
Транспортная среда, пробирка
	Стандартные, см. раздел № 17
Метод тестирования	Проточная цитофлюориметрия
Анализатор и тест-система	BioPleх 2200; BioRad (США)
Референтные значения Антитела IgM гетерофильные (AI , Индекс антител): Антитела IgG к капсидному антигену ВЭБ (AI , Индекс антител): . AI , Индекс антител): до 0,8 - отрицательный результат; больше 1,1 - положительный результат; 0,9-1,0 - сомнительный результат. AI , Индекс антител): до 0,8 - отрицательный результат; больше 1,1 - положительный результат; 0,9-1,0 - сомнительный результат. AI , Индекс антител): до 0,8 - отрицательный результат; больше 1,1 - положительный результат; 0,9-1,0 - сомнительный результат

Показания к назначению
Интерпретация результатов
Положительный результат	Отрицательный результат
реактивация инфекции;	Отсутствие инфицирования; атипичная первичная инфекция.

Описание:

Вирус Эпштейна-Барр

Этиология. Вирус герпеса человека 4 типа (ВГЧ-IV), или вирус Эпштейна-Барр, - лимфотропный вирус, его этиологическая роль известна при инфекционном мононуклеозе, лимфоме Беркитта, назофарингеальной карциноме, лимфопролиферативном синдроме, связанным с X-хромосомой, и синдроме хронической усталости. Это ДНК-геномный вирус рода Lymphocryptovirus подсемейства Gammaherpesvirinae семейства Herpesviridae , имеет 4 основных антигена: ранний антиген (early antigen - ЕА), капсидный антиген (viral capcide antigen - VCA), мембранный антиге н (membrane antigen - MA); ядерный антиген (Epstain-Barr Nuclea antigen - EBNA). Каждый из них образуется в определённой последовательности и индуцирует синтез соответствующих антител.

Эпидемиология . Источник заражения - инфицированный человек (с манифестной или стёртой формой болезни, а также вирусоноситель). Первичная инфекция чаще возникает в детском или молодом возрасте. Пути передачи вируса: воздушно-капельный, контактно-бытовой, трансфузионный, половой, трансплацентарный. После заражения репликация вируса в организме человека и формирование иммунного ответа могут протекать бессимптомно, либо проявляться в виде незначительных признаков ОРВИ. В некоторых случаях, чаще при наличии в данный период значимого ослабления иммунной системы, у пациента может развиться картина инфекционного мононуклеоза. Около 90% взрослого населения мира заражены вирусом Эпштейна-Барр и после первичной инфекции остаются пожизненными носителями вируса.

Патогенез. Входными воротами при инфекционном мононуклеозе является слизистая оболочка ротовой полости и верхних дыхательных путей. Вирус Эпштейна-Барр проникает через интактные эпителиальные слои путем трансцитоза в нижележащую лимфоидную ткань миндалин, в частности В-лимфоциты. После инфицирования число пораженных клеток увеличивается посредством вирус-зависимой клеточной пролиферации. Инфицированные В-лимфоциты могут значительное время находиться в тонзиллярных криптах, что позволяет вирусу выделяться во внешнюю среду со слюной. С инфицированными клетками вирус распространяется по другим лимфоидным тканям и периферической крови. В инфицированных вирусом клетках возможно два вида размножения: литический, то есть приводящий к гибели, лизису клетки-хозяина, и латентный, когда число вирусных копий небольшое и клетка не разрушается. При острой или активной инфекции преобладает литическая репликация вируса. Вирус может длительно находиться в В-лимфоцитах и эпителиоцитах назофарингеальной области и слюнных желез. Кроме того, он способен инфицировать другие клетки: Т-лимфоциты, NK-клетки, макрофаги, нейтрофилы, эпителиоциты сосудов. В ядре клетки-хозяина ДНК вируса может встраиваться в геном, вызывая хромосомные нарушения. Активное размножение вируса может происходить в результате ослабления иммунологического контроля, а также стимуляции размножения клеток, инфицированных вирусом под действием ряда факторов: острой бактериальной или вирусной инфекции, вакцинации, стрессов и т.д.

Клинические проявления. Инфекционный мононуклеоз - острое антропонозное вирусное инфекционное заболевание, характеризующееся лихорадкой, поражением ротоглотки, лимфатических узлов, печени и селезёнки и специфическими изменениями гемограммы. Инкубационный период заболевания - 4-6 недель. В продромальный период инфекция проявляется болями в мышцах, утомляемостью, общим недомоганием. Затем к ним присоединяется лихорадка, боль в горле, увеличение лимфатических узлов, селезёнки и иногда печени. В некоторых случаях появляется сыпь на руках и туловище. Симптомы сохраняются 2-4 недели. У детей инфекция часто протекает бессимптомно. Возможно несколько вариантов исхода острого инфекционного процесса:

1. Выздоровление.
2. Бессимптомное вирусоносительство или латентная инфекция.
3. Хроническая рецидивирующая инфекция:
а) хроническая активная инфекция (сохранение симптомов инфекционного мононуклеоза более 6 месяцев);
б) генерализованная форма (возможно поражение нервной системы (энцефалит, полинейропатии, менингит), других внутренних органов (миокардит, гломерулонефрит, лимфоцитарная интерстициальная пневмония, гепатит);
в) гемофагоцитарный синдром, ассоциированный с ВЭБ инфекцией;
г) стертые или атипичные формы (длительный субфебрилитет неясного генеза, клиника вторичного иммунодефицита - рецидивирующие бактериальные, грибковые, часто - микст-инфекции респираторного и желудочно-кишечного тракта, фурункулез и т.д.);
д) развитие онкологического (лимфопролиферативного) процесса (множественные поликлональные лимфомы, назофарингеальная карцинома, лейкоплакии языка и слизистых ротовой полости, рак желудка и кишечника и др.);
е) развитие аутоиммунных процессов (СКВ, ревматоидного артрита, синдрома Шегрена и др.);
ж) вирус Эпшейна-Барр может играть важную роль в возникновении синдрома хронической усталости.

Прогноз для больного с острой инфекцией, вызванной вирусом Эпштейна-Барр, зависит от наличия и степени выраженности иммунной дисфункции, генетической предрасположенности к ВЭБ-ассоциированным заболеваниям, а также от влияния внешних факторов (стресс, инфекции, операционные вмешательства, неблагоприятное воздействие окружающей среды), повреждающих иммунную систему.

У иммунокомпетентных пациентов инфицированные В-лимфоциты находятся под контролем Т-лимфоцитов, поэтому, в большинстве случаев, при реактивации инфекции протекание заболевания остается в субклинической форме. У пациентов со СПИДом клонирование непогибающих В-лифоцитов может вызывать развитие лимфомы.

Лабораторная диагностика основывается на определении серологических маркеров инфекции и выявлении методом ПЦР вируса в различных биологических жидкостях.

Гематологические изменения, напоминающие картину инфекционного мононуклеоза, могут наблюдаться и при цитомегаловирусной инфекции, токсоплазмозе, острых респираторных вирусных заболеваниях, ветряной оспе, кори, инфекционных гепатитах и других заболеваниях. Поэтому для дифференциальной диагностики целесообразно проведение ряда тестов.Специфическая серологическая диагностика инфекции основана на использовании комбинации тестов, выявляющих наличие IgG и IgM антител к различным белкам-антигенам вируса, что, в большинстве случаев, позволяет дифференцировать инфекцию и уточнить стадию патологического процесса.

Серологическая диагностика

Гетерофильные антитела к вирусу Эпштейна-Барр. Выявление гетерофильных антител является одним из критериев диагностики инфекционного мононуклеоза. Они относятся к классу иммуноглобулинов М (IgM) и появляются в течение 1-2-х недель от начала клинических проявлений заболевания. У 60% молодых лиц наблюдается положительный результат через 2 недели и у 90% через 4 недели от начала клинических проявлений, поэтому для диагностики инфекционного мононуклеоза необходимо проводить исследования на 1-й неделе (результат может быть отрицательным) и через 1-2 недели от начала клинических проявлений. Уровень гетерофильных антител снижается по окончании острого периода инфекционного процесса, однако их титр можно определить в течение 9 месяцев после появления клинических симптомов. Среди детей с инфекционным мононуклеозом в возрасте до 2 лет гетерофильные антитела выявляются только у 30% больных, в возрасте 2-4 года - 75%, старше 4 лет - более чем у 90%. Концентрация гетерофильных антител не дает перекрестной реакции и не коррелирует со специфическими антителами к ЭБВ, также не существует корреляции с тяжестью течения заболевания. Результаты исследования могут быть положительными при других вирусных заболеваниях. Если гетерофильные антитела не выявляются при наличии клинических проявлений, соответствующих инфекционному мононуклеозу, необходимо проводить исследование по определению специфических к вирусу Эпштейна-Барр антител.

Вирус Эпштейна-Барр (ранние антигены, ЕА), антитела IgG. Определение данных антител является тестом ранней диагностики острой первичной инфекции ВЭБ.IgG антитела к раннему антигену ЭБВ появляются в острый период первичной инфекции и быстро исчезают с выздоровлением. Появляются при реактивации, отсутствуют при атипичной форме заболевания. Высокие титры антител к раннему антигену выявляют при хронической Эпштейна-Барр вирусной инфекции, вызванных вирусом раковых и аутоиммунных заболеваниях, иммунодефицитных состояниях.

Вирус Эпштейна-Барр (капсидный антиген, VCA), антитела IgM. Первичная инфекция ВЭБ определяется серологически ранним появлением антител IgM VCA, которые могут появляться до клинических симптомов. Высокие тиры бывают на 1-6 неделе от начала инфекции, обычно исчезают через 1-6 мес. Этот тип антител обнаруживается также и при реактивации инфекции. Наличие VCA IgM на фоне отсутствия анти-EBNA IgG подтверждает первичную инфекцию. Длительная персистенция высоких титров этих антител характерна для хронической Эпштейна-Барр вирусной инфекции, опухолей, вызванных хронической Эпштейна-Барр вирусной инфекцией, и аутоиммунных заболеваний, вторичных иммунодефицитных состояниях. Антитела VCA IgM обнаруживаются иногда в малом титре при отсутствии подтвержденной недавно перенесенной инфекции (например, хроническая активная инфекция ВЭБ).

Вирус Эпштейна-Барр (капсидный антиген, VCA), антитела IgG. VCA IgG могут появиться очень рано (на 1-4 неделе), достигают пика ко 2 месяцу заболевания. В начале заболевания обнаруживаются в большинстве случаев. Только у 20% пациентов выявляют 4-кратное увеличение титра при исследовании в парных сыворотках. После выздоровления VCA IgG сохраняются пожизненно. Наличие VCA IgG свидетельствует о перенесенной инфекции и о наличии иммунитета к вирусу. У детей до 7 лет антитела VCA IgG могут не выявляться. Постоянное присутствие VCA IgG в высоких титрах указывает на хроническую фазу инфекции. Отрицательный результат данного теста обычно исключает прошлую инфекцию, хотя не всегда исключает острую инфекцию, если было произведено в раннем периоде острой фазы, когда VCA IgG находятся ещё на неопределяемом уровне. Результат единичного теста сам по себе не может служить основанием для постановки диагноза, его следует рассматривать в комплексе с клиническими наблюдениями и данными других диагностических процедур.

Вирус Эпштейна-Барр (капсидный антиген), авидность антител IgG. Исследование авидности иммуноглобулинов класса G (IgG) к вирусу Эпштейна-Барр - метод обследования, позволяющий определить степень эффективности специфического взаимодействия между молекулами антител и антигенов, скорость образования иммунного комплекса и полноту нейтрализации антигенов. Ранние вирусоспецифические IgG антитела, образующиеся при первичном инфицировании, отличаются низкой авидностью, которая возрастает в течение нескольких недель или месяцев.

Вирус Эпштейна-Барр (нуклеарный антиген, EBNA), антитела IgG. Антитела к ядерному антигену вируса Эпштейна-Барр редко выявляются в острой фазе заболевания, появляются в период выздоровления (через 3-12 месяцев от начала заболевания), могут сохраняться в течении многих лет после болезни. Отсутствие антител EBNA IgG при наличии VCA IgM свидетельствует о текущей инфекции, их обнаружение после ранее негативной реакции - о существующей инфекции. Если титр антител не меняется при исследовании в динамике (в острый период и при выздоровлении) - острая инфекция, вызванная Эпштейна-Барр вирусом исключается. При реактивации Эпштейна-Барр вирусной инфекции происходит повторное увеличение титра антител EBNA IgG. У больных с бессимптомной инфекцией обнаружение EBNA IgG вместе с антителами VCA IgM и IgG используется в дифференциации ранней стадии реконвалесценции от острой фазы инфекционного мононуклеоза.

Молекулярная диагностика ВЭБ-инфекции. Ни один из серологических тестов не является исключительно надежным для диагностики первичной ВЭБ-инфекции. Метод ПЦР является полезным дополнением к диагностической панели для этой цели, особенно если использовать его в качестве подтверждающего теста в сочетании с иммунологией. Определение ВЭБ методом ПЦР позволяет определить ДНК вируса в различных биологических материалах (буккальный, ротоглоточный, урогенитальный соскобы, кровь, моча, слюна, ликвор). Обнаружение ДНК вируса Эпштейна-Барр в исследуемом материале указывает на этиологическую роль вируса в развитии заболевания при наличии соответствующей клинической картины. Однако в связи с возможной длительной персистенцией вируса в организме, оценить его роль в развитии заболевания не всегда возможно.

Показатель	Характеристика
Материал	Венозная кровь
Правила подготовки пациента	Стандартные, см. раздел № 15
Транспортная среда, пробирка	Вакутайнер с/без антикоагулянта с/без гелевой фазы
Правила и условия транспортировки, стабильность пробы	Стандартные, см. раздел № 17
Метод тестирования	Проточная цитофлюориметрия
Анализатор и тест-система	BioPleх 2200; BioRad (США)
Референтные значения Антитела IgM гетерофильные (AI , Индекс антител): до 0,8 - отрицательный результат; больше 1,1 - положительный результат; 0,9-1,0 - сомнительный результат. Антитела IgG к капсидному антигену ВЭБ (AI , Индекс антител): до 0,8 - отрицательный результат; больше 1,1 - положительный результат; 0,9-1,0 - сомнительный результат. Антитела IgG к ранним антигенам ВЭБ (AI , Индекс антител): до 0,8 - отрицательный результат; больше 1,1 - положительный результат; 0,9-1,0 - сомнительный результат. Антитела IgM к капсидному антигену ВЭБ (AI , Индекс антител): до 0,8 - отрицательный результат; больше 1,1 - положительный результат; 0,9-1,0 - сомнительный результат. Антитела IgG к нуклеарному антигену ВЭБ (AI , Индекс антител): до 0,8 - отрицательный результат; больше 1,1 - положительный результат; 0,9-1,0 - сомнительный результат

Показания к назначению
Комплексная диагностика острой инфекции ВЭБ и оценка стадии текущей инфекции; подтверждение этиологической роли вируса Эпштейна-Барр при иммунодефицитных состояниях, связываемых с вирусом Эпштейна-Барр
Интерпретация результатов
Положительный результат	Отрицательный результат
Первичная острая или недавно перенесенная инфекция ВЭБ; реактивация инфекции; хроническая Эпштейна-Барр вирусная инфекция у больных с иммунодефицитом. При проведении теста в динамике повышение уровня VCA IgM указывает на прогрессирование инфекции из ранней фазы инфекции в острую стадию. Снижение уровня VCA IgM свидетельствует о прогрессировании инфекции из острой фазы в стадию выздоровления	Отсутствие инфицирования; ранние сроки текущей инфекции; поздние сроки текущей инфекции; атипичная первичная инфекция. При наличии клинических подозрений относительно инфицирования ВЭБ, повторное тестирование рекомендуется проводить через 1 неделю

Как подготовиться к анализу:

Анализ крови

Для исключения факторов, которые могут влиять на результаты исследования, необходимо придерживаться следующих правил подготовки:

• кровь для исследования сдается только натощак!
• перед сдачей венозной крови желательно 15 мин.отдых;
• за 12 часов до исследования следует исключить прием алкоголя, курение, прием пищи, ограничить физическую активность;
• исключить прием лекарств. Если отменить прием лекарств невозможно, необходимо проинформировать об этом лабораторию;
• детей до 5 лет, перед сдачей крови, обязательно поить кипяченной водой (порциями, до 150-200 ml, на протяжении 30 минут)

Описание

Подготовка

Показания

Интерпретация результатов

Описание

Метод определения Хемилюминесцентный иммуноанализ.

Исследуемый материал Сыворотка крови

Маркёр текущей или перенесённой инфекции вирусом Эпштейна-Барр.

Специфическая серологическая диагностика инфекции вирусом Эпштейна-Барр и вызванного этим вирусом инфекционного мононуклеоза основана на использовании комбинации тестов, выявляющих наличие IgG и IgM антител к различным антигенам, что позволяет дифференцировать инфекцию и уточнить стадию патологического процесса. Исследование даже однократно взятой сыворотки на разные виды антител может дать достаточно точное представление о текущей инфекции или реактивации, наличии иммунитета или восприимчивости к инфекции вирусом Эпштейна-Барр.

VCA IgG появляются вскоре после VCA IgM и в острой стадии инфекции обнаруживаются практически у всех больных. После выздоровления VCA IgG сохраняются пожизненно. При реактивации инфекции титры этих антител растут. Отрицательный результат данного теста обычно исключает прошлую инфекцию, хотя не всегда исключает острую инфекцию, если взятие крови было произведено в раннем периоде острой фазы, когда VCA IgG находятся ещё на неопределяемом уровне. При сохраняющихся клинических подозрениях в таких случаях следует повторить исследование через 10 - 14 дней для выявления сероконверсии. Положительный результат VCA IgG говорит об имевшей место экспозиции к вирусу. Дополнительное исследование VCA IgM (тест ) и EBNA IgG (тест ), а также EA-IgG (тест ) позволяет определить фазу инфекции (острая стадия, выздоровление, пастинфекция, реактивация). Результат единичного теста сам по себе не может служить основанием для постановки диагноза, его следует рассматривать в комплексе с клиническими наблюдениями и данными других диагностических процедур.

Тест используется в комбинации с тестами в Независимой лаборатории ИНВИТРО - анти-EA IgG , анти-VCA IgM , анти-EBNA IgG (см. таблицу).

Литература

1. Инфекционные болезни у детей. Ред. Д. Марри. М. Практика, 2006. 928 с.
2. Gorgievski-Hrisoho, W Hinderer, H Nebel-Schickel, et. al. Serodiagnosis of infectious mononucleosis by using recombinant Epstein-Barr virus antigens and enzyme-linked immunosorbent assay technology. J Clin Microbiol. 1990 October; 28(10): 2305 - 2311.

Подготовка

Показания к назначению

• Лабораторное подтверждение диагноза при клинических подозрениях на острый инфекционный мононуклеоз.
• Оценка стадии течения инфекции, лабораторное подтверждение диагноза при клинике хронического активного инфекционного мононуклеоза.
• Диагностика лимфопролиферативных и онкологических заболеваний, связываемых с вирусом Эпштейна-Барр.

Интерпретация результатов

Интерпретация результатов исследований содержит информацию для лечащего врача и не является диагнозом. Информацию из этого раздела нельзя использовать для самодиагностики и самолечения. Точный диагноз ставит врач, используя как результаты данного обследовани¤, так и нужную информацию из других источников: анамнеза, результатов других обследований и т.д.

Формат выдачи результата: количественный.

Единицы измерения в Независимой лаборатории ИНВИТРО: Ед/мл.

Референсные значения:

• > 20 Ед/мл - положительно.

Положительный результат:

1. острая инфекция вирусом Эпштейна-Барр;
2. инфекция в прошлом;
3. реактивация.

Отрицательный результат:

отсутствие инфицирования вирусом Эпштейна-Барр;

ранняя острая инфекция (при клинических подозрениях повторить в динамике через 10 - 14 дней).

Таблица. Интерпретация серологических данных.

Стадия инфекции	VCA IgM	VCA IgG	EA-IgG	EBNA IgG
Отсутствие инфекции и большая часть инкубационного периода (30 - 50 суток)
Подозрение на раннюю стадию первичной инфекции			-
Острая стадия первичной инфекции
Недавняя инфекция (менее 6 месяцев)
Перенесённая инфекция
Хроническая инфекция или её реактивация
Злокачественные новообразования, связанные с вирусом Эпштейна-Барр		++++

Вопросы
и ответы

Что такое вирус Эпштейна-Барр, какие вызывает заболевания?

Вирус Эпштейна-Барр (ВЭБ) относится к семейству герпесвирусов 4-го типа. Инфицированность ВЭБ достигает 90% в возрастной группе от 40 лет. Вирус передается воздушно-капельным, половым, парентеральным и трансплацентарным (от матери плоду) путем.

ВЭБ поражает В-лимфоциты, одновременно активируя их размножение, что служит причиной развития хронической скрытой инфекции. Он может быть причиной возникновения инфекционного мононуклеоза, лимфомы Беркитта, назофарингеальной карциномы, синдрома хронической усталости.

Для диагностики ВЭБ-инфекции и определения ее стадии используют комплекс тестов:

Для оценки результатов анализа необходимо обратиться к инфекционисту.

Вам помог ответ на вопрос?

Да Нет

Какие анализы надо сдать для диагностики инфекционного мононуклеоза?

Инфекционный мононуклеоз – заболевание, вызываемое вирусом Эпштейна-Барр (ВЭБ), относящегося к семейству герпесвирусов 4-го типа.

Инкубационный период длится от 4 до 7 недель. Для острой фазы характерны высокая температура тела, увеличение лимфоузлов, поражение рото- и носоглотки, увеличение печени и селезенки, сыпь на лице, туловище и конечностях. Продолжительность острой фазы заболевания, как правило, 3-4 недели, но может быть и дольше. Кроме того, инфекция может протекать со слабо выраженными симптомами ОРЗ, а в некоторых случаях вообще бессимптомно и выявляться случайно при лабораторном исследовании, которое включает:

• №1515 Клинический анализ крови;
• №186 Антитела класса IgM к капсидному антигену ВЭБ (VCA-IgM);
• №275 Антитела класса IgG к капсидному антигену ВЭБ (VCA IgG);
• №187 Антитела класса IgG к нуклеарному антигену ВЭБ (EBNA IgG);
• №255 Антитела класса IgG к раннему антигену ВЭБ (anti-EBV EA-D IgG);
• №351КР ВЭБ, определение ДНК в крови.

Вам помог ответ на вопрос?

Да Нет

В этом разделе вы можете узнать, сколько стоит выполнение данного исследования в вашем городе, ознакомиться с описанием теста и таблицей интерпретации результатов. Выбирая, где сдать анализ «Антитела класса IgG к капсидному антигену вируса Эпштейна-Барр (anti- Epstein-Barr viral capsid antigens IgG, EBV VCA IgG)» в Москве и других городах России, не забывайте, что цена анализа, стоимость процедуры взятия биоматериала, методы и сроки выполнения исследований в региональных медицинских офисах могут отличаться.

Анализ на вирус Эпштейна-Барр производится двумя способами: ИФА, который выявляет антитела к антигенам и устанавливает форму развития инфекции (хроническую, острую, бессимптомную), и ПЦР (полимерная цепная реакция). Метод ПЦР на вирус Эпштейна-Барр исследует ДНК клеток вируса, определяет его наличие или отсутствие у человека. ПЦР рекомендуется для обследования детей, так как организм ребёнка ещё не успевает выработать антитела, а также, когда результат ИФА вызывает сомнение.

Вирус Эпштейна-Барр (ВЭБ) относится к самым распространённым заболеваниям, его носителями являются почти 65% детей до трёх лет, а также 97% взрослых. Это одна из разновидностей герпесвирусов (4-го типа), которая после заражения вызывает заболевания:

1. Лимфоретикулярной системы: изменение лимфатических узлов, поражение печени и селезёнки.
2. Иммунной системы: поселяется внутри В-лимфоцитов, нарушает их функциональные свойства, что вызывает иммунодефицит, вызывает разрушение клеточного звена иммунитета.
3. Эпителиальных клеток дыхательных и пищеварительных органов: проявляется респираторным синдромом, а именно кашлем, одышкой, «ложным крупом», возможно поражение внутренних органов.

Считается, что ВЭБ иногда является провоцирующим фактором развития злокачественных новообразований: лимфомы Бёркитта, рака носоглотки, лимфогранулематоза, хотя окончательных доказательств этого нет. Кроме того, наблюдается аллергия почти у каждого четвёртого носителя хронической ВЭБ-инфекции.

Вирус сохраняется в организме всю жизнь, он вызывает хроническую инфекцию, которая обостряется при возникновении благоприятных для неё условий.

Что такое ПЦР

Известны две разновидности ВЭБ, но серологически они ничем не отличаются. Заражение возможно от носителя в конце инкубационного периода, весь срок протекания болезни, в течение полугода со дня выздоровления. У отдельных больных имеется способность время от времени выделять вирус, то есть становиться его носителями даже спустя многие месяцы после инфицирования.

ПЦР-диагностика предполагает выявление ДНК вируса путём использования методов молекулярной биологии. Для исследования используются особые ферменты, которые многократно копируют фрагменты ДНК и РНК клеток. Затем полученные фрагменты сверяются с базой данных, выявляется присутствие ВЭБ и его концентрация.

Материалом при определении ДНК вируса Эпштейна-Барр становятся слюна, слизь из ротовой или носовой полости, кровь, пробы спинномозговой жидкости, соскобы клеток урогенитального канала, моча.

Целесообразность выбора того или иного материала определяется врачом. Обычно для ПЦР предпочтительна кровь, которую забирают в колбу с раствором ЭДТА (6%).

У маленького ребёнка иммунитет находится в стадии установления, поэтому метод определения антител к ним не применяется, для детей используется ПЦР.

Результат ПЦР часто бывает положительным, поэтому требуется дифференцировать больного человека и вирусоносителя, для этого применяется анализ с различной чувствительностью:

• до 10 копий на одну пробу – для носителей;
• до 100 копий – при активном вирусе Эпштейна-Барр.

ПЦР даёт очень высокую степень правильности результата, но особенность этого анализа состоит в том, что он информативен только в период репликации, потому присутствует 30% ложноотрицательных результатов по причине отсутствия репликации на момент анализа.

В период беременности считается обязательным несколько раз сдать анализ ПЦР, если вирус впервые выявлен уже после наступления беременности, для своевременного обнаружения реактивации вируса.

Подготовка к сдаче анализа

При сдаче анализа на вирус Эпштейна-Барр требуется исключить все факторы, которые могут исказить результат ПЦР:

1. Биологический материал необходимо брать утром натощак.
2. Накануне проведения ПЦР рекомендуется отказаться от плотного ужина. Лучше немного перекусить за 9 часов до времени взятия биоматериала.
3. За трое суток до сдачи анализа исключить алкоголь, энергетические напитки, жирную, сладкую или мучную пищу.
4. За день до анализа исключить чай и кофе, газированные напитки.

Перед анализом маленьким детям дают кипячённую воду (до 200 мл в течение получаса). Не рекомендуется принимать лекарства, начиная за 10-14 дней до ПЦР, но если они необходимы по жизненным показаниям, то их названия нужно предоставить врачу, который будет расшифровывать анализ.

Диагностика вируса Эпштейна-Барр (ВЭБ): анализ крови, ДНК, ПЦР, печеночные пробы

Когда ПЦР будет готов

Известно несколько методик ПЦР-диагностики. Но самым достоверным и широко используемым стал анализ в реальном времени, при котором почти никогда не бывает ложноотрицательных показателей и доступен быстрый результат.

Результат ПЦР можно будет получить через несколько часов или несколько дней, все зависит от лаборатории и экстренности ситуации. Средняя продолжительность ожидания результата 1-2 дня.

Расшифровка ПЦР при вирусе Эпштейна-Барр

Самыми первыми причинами для назначения ПЦР являются превышение лейкоцитов, тромбоцитов и понижение нормы эритроцитов и гемоглобина крови. При выявлении таких показателей пациенту назначается дополнительная диагностика — ПЦР.

Результат исследования бывает положительным или отрицательным. Положительный результат ПЦР свидетельствует, что сдавший анализ человек - носитель ВЭБ, хотя его наличие не доказывает того, что присутствует инфекция в острой или хронической форме.

Это доказывает то, что ВЭБ когда-то проник внутрь организма, так как герпес характеризуется тем, что после первичного попадания в организм его уже ничем нельзя вывести из него.

Серология, ИФА, ПЦР при вирусе Эпштейна-Барр. Положительный и отрицательный результат

Отрицательный результат ПЦР обнаруживается, если человек не сталкивался с ВЭБ и не содержит его в своём организме.

Если требуется не только выявить присутствие вируса, но и определить стадию и форму заболевания, то назначается ИФА, анализ на , в ходе которого исследуются:

• антитела IgM VCA к капсидным антигенам вируса Эпштейна-Барр;
• IgG VCA - к ранним антигенам.

Присутствие и тех и других показывает, что заболевание находится в острой форме, потому что они исчезают в течение 4–6 недель после начала болезни.

ПЦР-диагностика считается молодым методом, но при этом достаточно достоверным. Выявить присутствие вируса возможно даже при наличии только одной молекулы днк-вируса. Ввиду высокой точности данный вид обследования считается эффективным способом выявить герпесвирус и проследить за ходом лечения. При этом ПЦР требует высокотехнологического оборудования с многоуровневой системой контроля и подготовленных специалистов.

Вирус Эпштейна-Барр относят к герпетическим вирусам. Он может длительно не вызывать патологий. Чтобы определить иммунный статус организма, потребуется исследовать кровь на иммуноглобулины.

Вирус Эпштейна-Барр обитает внутри почти каждого человека. Активизировавшись, он становится причиной разных болезней. Анализ на вирус эпштейна барра назначают при специфических жалобах пациента и проявлении характерных симптомов. Некоторые врачи советуют также обследоваться по этому вопросу в период планирования . Для определения вируса необходима комплексная диагностика.

Используют разные виды обследований на эпштейн барра, или коротко, ВЭБ. Так, метод ПЦР разработан для того, чтобы выявить наличие ДНК вируса, иммуноферментный анализ (серологические реакции) способен определить тип антител к вирусу, а исследовав кровь, можно наблюдать изменения различных значимых показателей. На основании полученной информации в совокупности с клиническими симптомами врач сможет определить проблему и при необходимости назначить лечение.

Показания к проведению анализа

Существуют следующие основания, на которых пациенту назначают анализ на вирус эпштейна барра:

• слабая иммунная система;
• увеличенные лимфоузлы (подчелюстные, на затылке, под подбородком);
• лейкопения;
• недавно перенесенная ОРВИ, которая сопровождалась лихорадкой с температурой до 40 градусов;
• обнаружение в крови характерных для инфекции частичек – атипичных мононуклеаров;
• Появление симптомов развития инфекционного мононуклеоза – патологии, которую ВЭБ провоцирует чаще всего.

Когда говорят о слабой иммунной системе, речь идёт о состоянии, которое наблюдается у людей с ВИЧ, вследствие химиотерапии, терапии после пересадки органов и т.п.

Основные исследования, которые могут показать наличие вируса, – это иммуноферментный анализ и ПЦР.

Иммуноферментный анализ

Это исследование, определяющее в крови содержание иммуноглобулинов – это особые антитела к вирусным антигенам. Обычно выявляют соединения типов IgG и IgM.

Их обнаруживают при помощи исследования сыворотки крови. В остром периоде инфекции иммуноглобулины появляются быстро, поэтому в этот момент можно сделать единичный забор материала для анализа и получить довольно точные результаты.

Это исследование помогает определить наличие иммунитета или восприимчивости обследуемого человека к вирусу Эпштейна-Барра.

ПЦР диагностика

Если провести ПЦР анализ, вирус эпштейна барр реально обнаружить, даже когда его содержание в организме невелико. Суть этого метода заключается в поиске ДНК вируса. Для анализа берут образцы биоматериалов:

• крови (лейкоцитарной массы);
• мокроты;
• мочи;
• слюны;
• соскоба эпителия из уретрального и цервикального каналов;
• околоплодных вод.

Однако чаще всего для этого теста используют кровь из вены. Оценка результатов анализа исходит из того, оказались они положительными или отрицательными. Положительный констатирует наличие возбудителя, а отрицательный, соответственно, его отсутствие.

Минус ПЦР в том, что этот анализ результативен только на этапе острой инфекции. Если заболевание уже появлялось раньше или существует в хронической форме, ПЦР не назначают.

Актуален анализ при необходимости определить ВЭБ у новорожденных. Это связано с неэффективностью в этот период серологических реакций из-за несформированной иммунной системы ребенка.

Кровь на вирус эпштейн барра для ПЦР и иммуноферментного анализа лучше сдавать натощак, при этом накануне отказаться от употребления жирной пищи.

Косвенные анализы на вирус Эпштейн-Барра

Существуют и так называемые косвенные анализы для определения этой инфекции. С их помощью лечащий врач сможет увидеть полную картину состояния пациента. К таким исследованиям относятся общий и биохимический анализ крови, а также исследование иммунного статуса.

Общий анализ может характерные для ВЭБ увеличение количества лимфоцитов и тромбоцитов, а также снижение уровня эритроцитов и понижение гемоглобина.

Биохимический анализ способен показывать состояние внутренних органов и систем. В частности, патологии печени и селезенки не редкое явление при размножении вируса Эпштейна Барра.

Однако эти результаты являются лишь вспомогательными. Например, если сдать кровь на второй неделе заболевания, обнаружится до 20% атипичных мононуклеаров. Но подобные признаки характерны для ОРВИ, инфекционного гепатита и других болезней.

Исследование иммунного статуса у людей с ВЭБ выявляет изменение функции и содержания специфических лимфоцитов, дисиммуноглобулинемию и прекращение выработки иммуноглобулина G. Эти результаты анализов демонстрируют, что иммунная система не способна контролировать размножение вируса.

Какие существуют антитела к вирусу Эпштейн-Барра

По мере распрострнения инфекции по организму накапливаются : ядерный (ЕВNA, от него зависит размножение инфекции), капсидный (VCA) и мембранный.

Антигены провоцируют образование особых антител. Исследование их помогает различить, на каком этапе находится болезнь. Именно анализ на антитела к вирусу во взрослом возрасте является точным способом определить, как развивается инфекция.

Антитела к антигену вирусного капсида

Антитела IgM к антигену вирусного капсида (оболочки) появляются в начале острой инфекции. Спустя месяц-полтора их уже не находят. Но они снова могут возникнуть в случае рецидива.

Антитела типа IgG появляются у заболевших почти сразу после исчезновения предыдущих антител и навсегда остаются в организме. Антитела IgG к раннему антигену обнаруживают в первые две недели болезни, а спустя 3-4 месяца они пропадают.

Антитела к ядерному антигену

Наличие антител IgG к ядерному антигену свидетельствует, что раньше пациент уже был заражен вирусом. Эти иммуноглобулины образуются спустя приблизительно полгода после начала заболевания.

Расшифровка анализа на вирус Эпштейна-Барр

Расшифровка анализа связана с тем, какая норма пороговых значений установлена в конкретной лаборатории.

Если по результатам исследования уровень антител к вирусу оказался ниже установленного значения, это означает, что инфекции не обнаружено. Когда уровень антител к вирусу выше, чем норма, считается, что ВЭБ диагностирован.

Если было проведено исследование для обнаружения инфекции, и результат по анти-IgG-VCA оказался положительным, а у пациента нет, значит он бессимптомный вирусоноситель. Обнаружение анти-IgG-ЕА означает протекание в организме инфекции хронической.

Схема – Интерпретация результатов анализов на ВЭБ

Форма инфекции	Aнтитела ккапсидному антигенуIgM	Aнтитела к капсидному антигену IgG	Антитела кантигену EBNA IgG
Отсутствует	–	–	–
В острой фазе	+	+/-	–
Хроническая	+/-	+/-	+
Перенесена	–	+/-	+
Бессимптомный носитель	–	–	–

Необходимо помнить, что для расшифровки результатов необходимо учитывать показатели, выявленные при проведении других анализов.

Заключение

Правильно поставить диагноз и определиться с лечением болезни врач может только после тщательного обследования пациента. Чтобы выявить или исключить ВЭБ, необходимо сдать несколько анализов, которые помогут увидеть полную клиническую картину. Обычно их делают в лабораториях. Некоторые из таких диагностических организаций работают даже в воскресенье и выдают результат через 3-4 дня.